微视光学对细胞表面多种糖分子的分布研究 二

 通过研究，既然成簇分布是所有糖分子共有的分布特征，并且GlcNAc已被证实是细胞膜上的功能结构域，那么这些糖分子之间是否有联系呢，它们是否都是膜上的功能结构域呢？我们进一步利用双色dSTORM成像研究了目标糖分子和GlcNAc的空间定位关系。从超分辨叠加图上（图A-F左和中），我们发现目标糖分子（红色）和GlcNAc（绿色）都有着明显的共定位（黄色）。尽管Fuc和GlcNAc的叠加图上黄色区域较弱，但这并不是共定位低造成的，而是由于Fuc簇本身就是最小的且簇密度也是最低的。类似于第二章中GlcNAc和脂筏的共定位分析，根据共定位区域（S）的大小，我们将二者的空间关系分为三类：彼此独立（无接触，白色框内）、互相关（相互接触但S< 0.02 μm²，紫色框内）、共定位（S≥0.02 μm²，黄色框内），如图A-F右所示。我们统计了这三类关系各自的比例来进一步表征目标糖分子和GlcNAc的分布关系。从共定位簇个数占目标糖分子簇个数或GlcNAc个数的百分比的分布图来看（图G和图H），即使共定位最不明显的Fuc，也有61.60±0.05%的Fuc簇和GlcNAc共定位；其他类型的目标糖分子则均表现出较高的共定位百分比：92.80±0.03%（Sia）、89.16±0.09%（oligosaccharide）、76.13±0.06%（Man）、84.14±0.04%（Gal）和68.30±0.08%（GalNAc）。反过来，以GlcNAc为“单位一”统计，所得结果是类似的。由于Fuc簇总数占GlcNAc簇总数的比例本身就较低，那么形成的共定位簇的个数占总GlcNAc簇的比例就相对其他目标糖分子稍低，为51.67±0.06%；与其他目标糖分子共定位的GlcNAc的比例都较高，分别为：92.12±0.05%（Sia）、94.73±0.05%（oligosaccharide）、87.72±0.05%（Man）、88.39±0.05%（Gal）和94.42±0.03%（GalNAc）。另外，我们通过共定位区域的面积大小来衡量两个簇的重叠程度（图I）。

  如图：目标糖分子和GlcNAc的双色超分辨及对二者分布关系的表征。（A-F）目标糖分子和GlcNAc的双色dSTORM成像重构图的叠加图（左）；在相应的放大图中，两种糖分子的空间定位关系更加清晰（中）；三种定位关系的典型分布图：彼此独立（白色边框）、共定位（紫色边框）、互相关（蓝色边框）；目标糖分子依次为：Sia (A), oligosaccharide (B), Fuc (C), Man (D), Gal (E), 和 GalNAc (F)。标尺为：5 μm（左），1 μm（中），200 nm（右）。（G和H）共定位簇总数占目标糖分子簇（红色柱）或GlcNAc簇（绿色柱）总数的比例分布图。（I）共定位区域（黄色柱）的平均面积和目标糖分子簇（红色柱）的原始平均面积的对比分布图。（J和K）共定位簇总面积占目标糖分子簇（红色柱）或GlcNAc簇（绿色柱）总面积的比例分布图。