超分辨荧光显微镜研究细胞表面GLUT1的成簇和活化机制 二

为验证GLUT1蛋白的成簇与脂筏存的关系，我们用双色dSTORM成像分别对HeLa细胞顶膜上的脂筏结构（图A）和GLUT1蛋白（图B）进行成像。从图A可以观察到脂筏在细胞膜上也是形成大小不同的簇状结构。通过将脂筏（图A）和GLUT1蛋白（图B）的超分辨重构图进行叠加，我们发现在二者的叠加图（图C）上，两种簇结构存在一定程度的共定位关系。接下来我们对这种共定位用Mander's系数，M1和M2，进行定量分析。通过计算和统计每个细胞样品上所有区域的共定位系数，我们得到了脂筏和GLUT1蛋白的在HeLa细胞表面每种位置关系的百分比。其中高度重叠和部分重叠这两部分被统一看作GLUT1与脂筏共定位。结果显示，35%的GLUT1蛋白在HeLa细胞膜上是与脂筏结构共定位的，其余部分则可能位于别的成分组成的脂筏结构或者非脂筏结构中。这暗示我们GLUT1团簇结构的形成不仅有脂筏结构的影响，同时可能有别的因素影响GLUT1蛋白的聚集。同时，这种维持细胞膜天然状态的成像也更加直观的让我们看到了GLUT1蛋白与脂筏结构之间的关系。 

如图    揭示HeLa细胞膜上脂筏与GLUT1之间相对空间分布的双色dSTORM成像。（A和B）在同一细胞膜上用Alexa 647偶联CT-B标记的脂筏结构（A）和用Alexa 532偶联GLUT1抗体标记的GLUT1蛋白（B）的dSTORM重构图。（C）显示脂筏（红）和GLUT1共定位的双色dSTORM 叠加图。（D-G）GLUT1和脂筏四中不同位置关系的代表图，依次为重叠（D），部分重叠（E），边缘相接（F）和分离（G）。（H）四中定位关系所占比例的统计分析柱状图。图A-C标尺：5 μm；D-G标尺：200 nm。