超分辨荧光显微镜研究细胞表面GLUT1的成簇和活化机制 三

推测GLUT1蛋白簇不能跟富含GM1的脂筏结构完全共定位的原因可能有两个：（a）GLUT1蛋白可能与由其他成分组成的脂筏结构共定位分布；（b）其他因子参与调控GLUT1蛋白成簇。因此，我们决定先进一步确定脂筏结构在GLUT1成簇过程中的作用。由于脂筏是富含胆固醇和鞘磷脂的结构域，所以可以通过抽提胆固醇来破坏脂筏结构的完整性。为了进一步证实脂筏在GLUT1蛋白簇与脂筏结构的关系，我们首先用10 mM的Methyl-β-cyclodextrin（M-β-CD）抽提胆固醇，破坏细胞膜的脂筏结构。接下来，我们用dSTORM成像技术对正常细胞和脂筏被破坏细胞上的GLUT1进行成像观察。图中A-D显示了M-β-CD处理前后，GLUT1蛋白在HeLa细胞膜表面上成簇分布的变化。可以看到胆固醇被抽提后，许多GLUT1蛋白簇的尺寸变小，有的甚至消失。结果显示在脂筏结构被破坏后GLUT1的成簇能力和簇大小都明显减小。 

   如图. 脂筏结构被破坏后GLUT1蛋白簇的变化。（A-D）HeLa细胞膜上GLUT1在正常细胞（A）和M-β-CD处理细胞（C）上的dSTORM重构图，及其白色框选中区域相应的放大图（B和D）。其中A和C图的标尺是5 μm，图B和D的标尺是2μm。（E）正常和M-β-CD处理细胞的代表性的Ripley's K函数曲线图。（F）单位面积簇个数。（G）单位面积内单独分布的GLUT1分子和包含不同分子数目的GLUT1团簇数目。