联用仪器AFM和dSTORM性能测试 一

为了考察三维超分辨荧光和形貌联用仪器的性能，采用G-actin在体外聚合形成的F-actin为测试样品，并分别进行AFM和dSTORM成像。如图A所示，AFM高分辨率形貌图显示了单条纤维状凸起物。根据F-actin的纤维状结构，表明此凸起物为F-actin蛋白微丝。为测定此条F-actin微丝的平均高度和宽度，在垂直于微丝的方向，对不同位置进行划线分析，获取高度分布曲线，并经高斯分布拟合测得该微丝的平均高度和半峰全宽分别为7.5 nm和15 nm。如图B所示，dSTORM重构图显示了特异性标记蛋白F-actin的空间分布，dSTORM放大图表明dSTORM成像能够区分两条相邻的F-actin微丝。为测定dSTORM成像分辨率，对dSTORM放大图中的微丝进行分析，获取dSTORM定位点沿垂直于微丝方向的分布图，经高斯分布拟合测得这两条相邻F-actin微丝间的距离为41 nm、半峰全宽分别为33 nm和22 nm。将上述测定的结果与文献中单聚F-actin微丝的直径（8 nm）进行比较，证实搭建的AFM-dSTORM联用显微镜能够为生物样品在液相环境中分别提供高分辨率的AFM和dSTORM图像，其中AFM的横向和垂直分辨率分别为10~20 nm和0.1 nm，dSTORM的分辨率为~20 nm。 

如图. 利用体外聚合纤维状肌动蛋白（F-actin）测试AFM-dSTORM联用系统的性能。（A）F-actin在APTES-盖玻片上的AFM图像。曲线图1、2和3显示了对应线条1、2和3处的高度分布，且这些线条垂直于F-actin微丝方向。（B）鬼笔环肽-Alexa647特异性标记的F-actin蛋白的dSTORM图像。插图是白色方框选区内的放大图。插图中相邻F-actin微丝的截面分布显示在右侧图像中。标尺：100 nm（A），2 μm（B），50 nm（插图）。