抑制剂探针用于PSMA在细胞膜上的分布 一

PSMA-617是一种可以特异性与PSMA结合的抑制剂，PSM-617结合放射性元素被用于前列腺癌的放射性成像。通常来说，抑制剂不仅可以起到抑制作用，而且同时具有识别标记的功能，因此我们利用PSMA-617这种抑制剂识别PSMA。由于dSTORM需要特殊的光闪烁染料，我们在抑制剂上连接一种通用的dSTORM染料TAMRA，合成一种可以特异性识别PSMA的超分辨成像探针。相比于传统的图像（如图1a），超分辨图像显示出PSMA在细胞膜上亚衍射极限的分布情况（如图1b），为了确保较高的分辨率，FRC方法测量了获得的超分辨图像的分辨率，从蓝色到红色，数值越来越大，代表分辨率越来越低，图中显示出最高分辨率约为30 nm（如图1c）。此外，为了估测抑制剂是否能特异性标记细胞膜PSMA，我们同时用抗体和抑制剂探针标记PSMA，进行双色成像，图中2a显示抑制剂探针和抗体有一个比较高的重合，共定位系数CBC值在1处有最高峰，代表这两种探针有较高的共定位，说明抑制剂探针可以特异性识别细胞膜上的PSMA。更重要的是，基于抑制剂发展的探针对于在单分子水平上观察细胞膜蛋白是可行的。
 
     如图1. 细胞膜PSMA的传统的TIRF图像（a），dSTORM超分辨图像（b）及对应的FRC图像（c）。超分辨图像显示了更清晰的PSMA分布。分块的傅里叶环相关系数分布图显示出最高分辨率为30 nm。
 
如图2. 抑制剂探针和抗体的双色成像。（a）Alexa 647连接的抗体探针和TAMRA连接的抑制剂探针同时标记细胞膜上PSMA。微球校正x-y漂移和红绿通道之间的光学配准。图中标尺为5 µm。（b）用CBC分析了共定位参数。