抑制剂探针用于PSMA在细胞膜上的分布 二

抗体通常用来标记膜蛋白，但抗体在标记时有些限制，大尺寸容易增加定位的不准确度。我们用抑制剂探针标记细胞顶膜表面（图a）和基底膜表面的PSMA，同时与抗体做了比较（图b）。我们首先比较了两种探针的标记密度，结果显示，对于顶膜表面来说，抑制剂探针单位面积的标记密度达到2306 ± 152 μm^-2，抗体只有1902 ± 102 μm^-2，对于基底膜表面来说，这两种探针的标记密度差异达到801 μm^-2，表明抑制剂探针能提供更好密度的PSMA识别能力，尤其对于细胞膜基底膜表面的PSMA，抗体存在不完全标记现象（图c）。除此之外，SR-Tesseler的方法也用来提取这两种探针识别的簇信息。无论顶膜表面还是基底膜表面，单位面积内抗体识别的簇都要比抑制剂至少少一个（图d），除此之外，通过比较两种探针识别的簇面积，我们发现，对于顶膜表面来说，抑制剂识别的簇面积要小于抗体，说明在饱和标记的情况下，抑制剂探针识别的簇要小于抗体；而在基底膜表面，抑制剂探针识别的簇面积大约是抗体的2倍，说明抑制剂的小尺寸使其比抗体更容易结合细胞膜基底膜表面的PSMA（图e）。
以上结果表明了抑制剂探针具有更准确的蛋白识别能力。传统的抗体尺寸比较大，并且为多价态，在识别膜表面的蛋白时，容易导致交联和潜在空间位阻，相比较而言，抑制剂探针尺寸较小，为单价态，这些特征使其以高精度定位蛋白。因此，抑制剂探针可以识别更多的PSMA并且能更好的区分临近的簇。

如图  抑制剂探针和抗体探针标记的区别。抑制剂探针和抗体对细胞顶膜表面（a）和基底膜表面（b）PSMA的超分辨成像。标尺为5 μm。（c-e）对抑制剂探针和抗体标记的超分辨图像的定量分析：每平方微米的定位数（c）、簇个数（d）和平均簇面积（e）。