联用仪器AFM和dSTORM性能测试 三

为定量分析AFM和dSTORM图像间的匹配效果，通过比较dSTORM定位点出现在基底处（h = 0）以及F-actin处（h > 0）的几率来确定以及优化这两种图像间的重叠程度，即比较h = 0及h > 0处的dSTORM定位点密度。如图所示，h > 0处的dSTORM定位点密度为2353 μm^-2，而h = 0处的dSTORM定位点密度只有318 μm^-2，表明dSTORM定位点出现在F-actin处的几率大于出现在基底处，即证明AFM和dSTORM图像间的重叠程度很好。为了进一步观察特异性标记蛋白F-actin在AFM形貌图中的分布，需要对AFM高度和具体蛋白F-actin定位点分布间的关联性进行分析研究。因此，需在形貌图中选取具有不同高度的纤维状凸起物结构（图A），并在联用图像中的对应位置提取AFM高度及dSTORM定位点信息（图B）。图C显示了AFM高度和对应F-actin蛋白的定位分布间的相关性，表明dSTORM定位点基本出现在纤维状凸起物处。此外，图C还显示了AFM高度值越大，则定位在相应区域的dSTORM定位点数量越多，表明dSTORM定位点分布与AFM高度呈正相关。综上，此联用仪器可实现在单分子水平上对具体成分的空间分布和整体形貌间的关联分析。

如图. 关联F-actin联用图像中的AFM高度和dSTORM定位点分布。（A）F-actin的形貌图。标尺为500 nm。（B）F-actin的相应联用图像。标尺为500 nm。（C）截面图显示了AFM高度和对应F-actin蛋白定位点分布间的相关性。截面图1、2和3分别对应于图A和B中的蓝色线条1、2和3。