NKA和AnkG在HBE细胞膜中的定位 二

为了阐明特定蛋白簇与颗粒状凸起物之间的关系，我们用H-SET对dSTORM图像进行处理，以校正过计数效应，区分蛋白质簇和单个蛋白分子，并通过DBSCAN识别AnkG或NKA分子形成的蛋白簇。如图G-I所示，在联用图像中，H-SET处理后的AnkG和NKA蛋白的定位点分布分别用绿色和蓝色的点表示，而AnkG和NKA蛋白簇分别用绿色和蓝色的多边形框圈出。通过关联HBE内膜形貌与特定蛋白AnkG和NKA聚集组装的团簇，发现由多个特定蛋白分子（AnkG或NKA）组装而成特定蛋白簇，即特定蛋白功能域，以及由多种特定蛋白分子（AnkG和NKA）相互作用形成的功能微区都占据了若干颗粒状凸起物，表明特定蛋白功能域或功能微区是通过聚集蛋白岛组装而成。为了更直观地分析特定蛋白簇与颗粒状凸起物间的相关性，在联用图中的特定蛋白簇内选取沿X轴方向的条带区域，并对颗粒凸起物的高度与特定蛋白AnkG和NKA分布位置间的相关性进行分析。如图J所示，对应于每个选区的绘图显示了AFM高度与AnkG和NKA分子位置之间的关系。从这些图中，我们发现AnkG和NKA分子密集分布在具有高度起伏的AFM高度曲线上。此结果进一步表明，尺寸为几百纳米的特定蛋白簇是由若干尺寸为几十纳米的蛋白岛聚集组装而成。

如图 . 将AnkG和NKA定位于细胞膜的高分辨率形貌。（A-C）联用高分辨率AFM图像（A）与AnkG（B）和NKA（C）的双色dSTORM图像。（D，E）叠加图显示AnkG（D）和NKA（E）在膜形貌中的分布。（F）图A-C的叠加图。（G-I）在联用图像中圈出特定蛋白质簇。绿色（蓝色）点代表H-SET估计的每个AnkG（NKA）分子的真实位置，绿色（蓝色）多边形框代表DBSCAN算法识别的AnkG（NKA）蛋白簇。（J）AFM高度与AnkG和NKA蛋白分布位置间的相关性。白色条形框代表选择的区域。标尺：200 nm（A-I）。