小分子肽标记用于研究细胞膜EpCAM蛋白的成像分析 一

为评价超分辨率图像的质量，我们采用分块傅里叶环相关（FRC）分辨率映射的方法检测了MCF-7细胞膜上Cy3连接的小分子肽或抗体的分辨率。计算FRC时，将图像分块，每一块代表不同的分辨率（图a）。统计了5次实验的10幅图像的最小分辨率，得到小分子肽标记图像的平均最小分辨率为32.1 nm，抗体标记为33.3 nm，结果非常相似，这两种探针之间没有显著性差异（图b），这是由于不同的标记分子连接相同的染料导致的。虽然这两种探针获得的分辨率相似，但由于抗体的大尺寸和多个结合位点，标记效率可能不同，这反映在饱和浓度、标记密度和特异性识别方面。我们首先通过计算细胞膜上的定位密度来测量肽和抗体的饱和标记浓度。两种标记物的定位密度曲线均先随浓度的增加而增大，并最终保持稳定。通过比较摩尔浓度，小分子肽染色在0.64 μM浓度下，为1225 ± 140 μm^-2个定位点，抗体在0.034 μM处达到1100 ± 117个定位点。此外，在两种标记的蛋白质簇存在差异，用SR-Tesseler方法，对膜蛋白簇进行了分析，结果表明，肽比抗体识别的EpCAM簇面积要小，识别的簇个数要多于抗体（图4-5d和4-5e），表明肽具有更强、更准确的蛋白簇识别能力。
 
如图——小分子肽和抗体对细胞膜上EpCAM的识别。（a）分别用Cy3结合的肽和抗体标记EpCAM，传统的图像、相应的dSTORM图像和的FRC图。标尺，5 μm。（b）FRC分辨率的比较。(c−e)小分子肽和抗体标记的EpCAM的定量分析：每平方微米的定位数（c）、簇个数（d）和平均簇面积（e）。